大肠埃希菌是引起尿路感染常见的细菌之一，但嗜CO₂大肠埃希菌较为罕见^［1-3］。2021年9月7日，本院从一名女性患者尿液中分离出一株大肠埃希菌，发现此菌株在药敏板上不生长，经过反复实验证实为一株CO₂依赖性大肠埃希菌，现报道如下。

患者，女，64岁。因间断发热10余天，于2021年9月6日来我院就诊。患者于10余天前无明显诱因间断出现发热，以夜间发热为主，最高体温38度。伴尿频、纳差、全身乏力，无咳嗽咳痰、无咽痛、无尿急尿痛。

2.1培养及鉴定

9月7日 微生物室接收到患者中段尿标本，取10ul接种到哥伦比亚血琼脂平皿上，置35度5%CO₂环境中孵育。

9月8日 经24小时孵育，培养出革兰氏阴性杆菌，经梅里埃质谱仪MS鉴定为大肠埃希菌（菌株a）。菌量>10万cfu/ml 。

2.2药敏试验

2.2.1首次药敏试验

9月8日  按照Aris-2x全自动药敏仪操作规程进行菌液的配制、稀释、加样, 然后封板，放入Aris-2x仪器中进行孵育。9月9日 仪器自动读板没有结果，取出药敏板，发现整个药敏板无菌生长，阳性对照孔也无菌生长。

考虑可能是操作不当的原因所造成，第二次由另外一位检验师严格按操作规程进行菌液的配制、稀释、加样，然后置于仪器中孵育。9月10日 仪器读板再次失败,整个药敏板无菌生长，阳性对照孔无菌生长。经过反复思考，再次重复菌液配制的过程：把“菌株a”用生理盐水配制成0.5麦氏的菌液（菌液1）; 取（菌液1）10ul加入11ml的肉汤中进行稀释（菌液2）。然后把菌液1和菌液2分别接种到哥伦比亚血琼脂平皿上，放于35度5%CO₂环境中孵育。9月11日，观察发现转种在哥伦比亚血琼脂平皿上的菌液1和菌液2均生长良好。

2.2.2二次药敏试验

菌株在生理盐水和肉汤中生长良好，为什么在药敏板上不生长？是没有放CO₂环境中吗？于是把“菌株a” 再次按照药敏操作流程进行菌液的配制、稀释、加样（同时加样到A、B两块药敏板进行生长对照），均不封板。A药敏板放仪器中孵育，B药敏板放于35度5%CO₂环境中孵育。9月12日， 孵育24小时后，仪器中的A药敏板依然读不出结果，阳性对照无菌生长。从CO₂培养箱中取出B板，肉眼观察发现：B板阳性对照孔生长良好。 

为了确认此菌株对CO₂依赖性，将菌株a和ATCC 8739同时接种在a, b两个血琼脂平皿上进行对照生长，a平皿放在5%CO₂环境中孵育，b平皿放在普通培养箱内孵育。

9月13日 观察两块平皿的生长情况：a平皿上两种菌株均生长良好；b平皿上左边无菌生长（菌株a），而右边菌株（ATCC8739）生长良好。

a   菌株a /8739（CO₂环境）

b   菌株a/ 8739 （普通环境）

2.3试验结论

通过以上实验，证明“菌株a”为一株CO₂依赖性大肠埃希菌。此菌株的分离培养需要5%-10%CO₂，在哥伦比亚血琼脂平皿上形成圆形、光滑、湿润的菌落。

2021年9月6日，患者因发热，头痛，尿频，乏力来我院就诊，门诊以“发热待查”收治入院。

2021年9月7日，行尿培养

2021年9月9日，我实验室发出尿培养报告“培养出大肠埃希菌 计数>10万cfu/ml”.根据培养结果，临床经验性使用头孢哌酮/舒巴坦进行抗感染治疗。2021年9月12日，患者体温正常，但仍感发热，无尿频尿急。

血常规：WBC:7.8G，PCT正常，CRP正常。

尿常规：WBC1+,RBC阴性,PRO:1+

医嘱不变，继续使用头孢哌酮/舒巴坦进行抗感染治疗

2021年9月14日，患者无发热，无尿频尿急，一般状况良好，准予出院。

此株从尿液中分离的CO₂依赖性大肠埃希菌，在临床表现及耐药性方面与普通大肠埃希菌相似，但此菌株的生长需要一定浓度的CO₂，因此分离培养和药敏生长试验均需在CO₂环境中进行。通常情况下实验室没有将尿液培养基放入 CO₂ 环境中孵育，或者有些小型实验室没有 CO₂ 培养箱，导致此菌株检出率降低。所以，要求原代培养使用 CO₂培养箱可减少该类细菌的漏检，在无CO₂ 培养箱的情况下建议处理此类培养标本要有一个初步革兰染色涂片，当革兰染色与培养结果不一致，需要考虑细菌生长的环境，避免漏检或假阴性培养。同样，药敏板一般都是放在普通环境中孵育，当药敏试验失败，就需要考虑菌株的生长环境是否合适，譬如是否需要CO₂。

另外，试验发现此菌株可在克氏双糖管生长: CO₂依赖性大肠埃希菌在微氧或厌氧环境下,能依靠分解环境中的糖类所产生的CO₂供自身生长,当CO₂不再产生，菌株就会停止生长。这一生长特性在环境学研究方面可能有一定的应用价值。