该研究收集了2014年至2021年从上海、浙江、广东、四川、湖北、江西和内蒙古七个省市分离出643株MRSA，并对其进行全基因组测序，共鉴定出52株（8.09%）ST764型MRSA，包括29株ST764-t002型菌株和21株 ST764-t1084型菌株。基于测序数据分析这些菌株的遗传耐药性和毒力特征，并通过系统进化分析重建ST764克隆的进化动力学。结果显示，ST764菌株携带多种耐药基因和毒力基因。与ST764-t002菌株相比，在ST764-t1084菌株中检测到更多包括ant(4')-Ib，aac(6')-aph(2'')和aadD在内的氨基糖苷类基因。莫匹罗星耐药基因mupA、消毒剂耐药基因qacB和磷霉素抗性基因fosD也表现出不同的耐药谱（图1）。临床抗菌药物敏感性实验显示，所有ST764分离株均对红霉素、克林霉素和四环素耐药，对万古霉素和利奈唑胺均敏感。毒力基因分析显示ST764-t002型和ST764-t1084型菌株具有类似的毒力基因谱（图2）。

图1. 52株ST764金黄色葡萄球菌的耐药基因谱（左）和药敏谱（右）

图2. 52株ST764金黄色葡萄球菌毒力基因谱分析。

通过溶血活性检测、α-毒素水平检测、生物被膜形成实验、细胞黏附实验、大蜡螟模型、小鼠皮肤脓肿模型全面评估了ST764的毒力特征。结果表明中国分离株ST764-t1084具有较高的溶血活性和α-毒素水平（图3A-D）。而ST764-t002型菌株具有更高的生物膜形成能力和细胞黏附能力（图3E-F）。RT-qPCR结果表明ST764-t1084高毒力特征与saeRS的高表达有关（图4）。在小鼠脓肿模型和大蜡螟模型中，ST764-t1084菌株表现出与以高毒力著称的USA300-LAC相似的致病水平（图5）。与ST764-t002菌株相比，ST764-t1084导致了更严重的皮肤感染。

图3. ST764金黄色葡萄球菌的表型试验

图4. RT-qPCR检测ST764-t002和ST764-t1084分离株毒力基因的表达水平

图5. 金黄色葡萄球菌ST764的体内毒力测定

为了探索ST764型金葡菌的起源、进化，本研究将这52株ST764分离株与NCBI RefSeq的来自全球97株ST764菌株构建了系统发育树。系统发育分析表明，来自中国的110个ST764分离株与来自日本的KUN1163分离株的亲缘关系密切（图6）。这表明中国的ST764-t002亚克隆可能是从日本的ST764谱系进化而来。值得注意的是，所有ST764-t1084分离株均来自中国，并在clade II中形成了一个独特的单系群。这表明ST764-t1084亚克隆可能是在中国形成的一种新的spa型。

图6. 金黄色葡萄球菌ST764的系统发育分析

为了进一步研究来自中国的ST764菌株与日本之间的变异，本研究鉴定了先前描述的ACME SCCmec遗传元件。值得注意的是，与KUN1163相比，几乎所有ST764-t002分离株（28/29，96.55%）在SCCmec II区都存在一个大约5kb的明显缺失（图 7）。这段缺失区域包含质粒重组酶基因pre、博莱霉素耐药基因ble和氨基糖苷类耐药基因ant(4')。这些ST764-t002分离株在第三支中形成了一个大群体，并在过去五年中在中国传播，这表明较短的SCCmec II variant可能具有更低的生物成本和更好的适应度。

本研究对中国的ST764型金黄色葡萄球菌进行了相关毒力表型和分子遗传特征分析。值得注意的是，ST764-t1084菌株的毒力水平与USA300-LAC 相似，这对中国公共卫生构成新的威胁。系统发育分析表明，中国的ST764-t002亚克隆可能是从日本的ST764谱系进化而来，而ST764-t1084是一种不同于其他ST764亚克隆的新spa型。此外，大多数中国ST764分离株（69.23%）的SCCmec区域存在一个约5 kb的缺失。这种变异可能会带来补偿的生物学代价，导致ST764分离株进一步传播。未来应对ST764克隆在中国的传播进行动态监测，尤其警惕ST764-t1084高毒力毒株的传播。

作者｜肖阳华 （上海市肺科医院）

审校｜余方友 （上海市肺科医院）