与WS/T497-2017相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：

■ 增加了术语“酵母菌”“丝状真菌”“双相真菌”“菌丝”“假菌丝”和“孢子”(见3.2-3.7)；

■ 删除了术语“最小抑菌浓度”“剂量依赖敏感”“最低有效浓度”和“折点”(见2017年版的2.2-2.5)；

■ 增加了缩略语(见第4章)；

■ 更改了标本采集、运送及处理的要求(见第5章，2017年版的第3章)；

■ 增加了标本直接镜检常用染色方法的特点和应用描述(见6.2)；

■ 更改了标本直接镜检的结果解释(见6.3，2017年版的4.3)；

■ 更改了真菌培养技术要求(见第7章，2017年版的第5章)；

■ 更改了培养后菌种鉴定技术要求(见第8章，2017年版的第6章)；

■ 更改了真菌1,3-β-D-葡聚糖检测(G试验)、曲霉半乳甘露聚糖检测(GM试验)、隐球菌英膜多糖抗原检测和标本直接核酸检测的方法描述(见9.2.1~9.2.3、9.4，2017年版的7.1~7.4)；

■ 增加了念珠菌甘露聚糖抗原、曲霉特异性IgG抗体、曲霉特异性Ig抗体和念珠菌特异性IgG抗体检测方法的描述(见9.2.4、9.3)；

■ 删除了真菌药敏试验方法技术要求(见2017年版的第8章)；

■ 增加了酵母菌和丝状真菌天然耐药描述及不同标本中念珠菌属药敏结果报告原则(见10.3、10.4)；

■ 增加了生物安全要求(见第11章)；

■ 增加了质量控制(见第12章)。

（一） 诊断技术多样化

新版最大的亮点，增加了念珠菌甘露聚糖抗原、曲霉特异性IgG、IgE抗体、念珠菌特异性IgG抗体和高通量测序等检测技术。对慢性肺曲霉病或变应性支气管肺曲霉病的诊断提供了实验室依据，对于危重或疑难病例，临床医生可以更有依据地开具mNGS医嘱。但新版也提醒真菌核酸提取效率低，阴性结果不能排除真菌感染。新版明确了G试验其在念珠菌属、曲霉属、镰刀菌属、枝顶孢属、暗色真菌、耶氏肺孢子菌等感染时都可升高，但不适用于隐球菌和毛霉病的辅助诊断。GM试验新版强调了支气管肺泡灌洗液（BALF）检测的价值，特别是对于非粒缺患者或已用药患者，血清GM敏感性低，推荐送检BALF。

宁按：

隐球菌荚膜多糖抗原阳性，提到可作为隐球菌病确诊证据之一——到位。G试验是辅助诊断侵袭性真菌病的重要方法，如果进一步明确probable diagnosis层面，就更好了；GM试验也是这样。

高通量测序需要加入。国家管理特点、没有标准化、室间质评和室内质控的难题，可以提及。“无偏倚”：最好是明确“相对无偏倚”或“原理上无偏倚”。实际工作中，真菌/分支杆菌的核酸提取率低，RNA需要单独的流程，信息学分析等，这些还是会引起一定偏倚。

分子检测没有提及耐药基因。

从专业发展角度看，对标本直接进行分子检测，几乎是上一版与这一版最大的不同，体现了时代的进步。这中间，主要是PCR检测试剂盒标的准化很有挑战性。

（二）标本采集与处理

应优先采集无菌部位标本；从有菌部位采集标本时，尽可能减少定植菌群的污染。对于系统性或侵袭性真菌感染，深部标本优于浅部标本。由于菌体常常侵及周围组织，采集组织标本较佳。体液标本离心后使用沉淀物培养可更加真菌检出率。新版对标本处理的要求更加严格，特别是针对不同标本类型的处理方式。血液标本明确建议使用真菌专用血培养瓶或需氧瓶，要求按血培养瓶推荐的最大量采血。无菌体液（脑脊液、腹水、胸水等）新版明确若标本量≥2 mL，宜离心（2000×g，10 min）后取沉淀物接种，＜2mL则将标本直接接种于培养基。若有凝块先研磨后再接种。宜使用细胞离心机对无菌体液进行制片镜检(血性标本除外)。组织标本特别强调疑似毛霉目感染时，不可研磨。若怀疑组织胞浆菌等胞内菌感染，则应研磨组织后培养。如标本量充足，建议将剪碎的组织和研磨的组织混合后接种，以兼顾不同真菌的生长。一般采用点种方式接种于平板培养基。对于显微镜检查，组织标本需要研磨后进行涂片制备。新版明确列出不推荐送检的标本，如尿管尖端、导尿袋尿液、恶露、呕吐物、胃内容物、粪便（除非直接镜检），新版也提出建议拒收情况，包括标本标识与申请单不符、标识错误或无标识、未采用无菌容器或容器选择不当、采集部位未按规定消毒或清洁创口、保存方式不当、保存时间超限、标本容器渗漏等，对临床开单或采样有重要指导意义。

宁按：

表2的血液标本，最好是区分经皮穿刺静脉血、经导管血液。

培养的接种操作：尿液需要定量培养。1为了确诊尿路感染时的治疗效果判断；2为了无症状菌尿的判断等；注意，不是为了确诊尿路感染。BALF也可以定量培养，为了确诊感染时的治疗效果判断等。血管内插管、肺组织、烧伤组织，都可以考虑定量培养。

（三）标本直接镜检

推荐同时进行真菌直接镜检和真菌培养。标本直接镜检时,先在低倍镜下观察有无酵母细胞、孢子和菌丝，然后在高倍镜下观察孢子和菌丝的形态、颜色、大小和排列等特征。例如，镜下看到“酵母细胞及假菌丝”，多提示念珠菌属；看到“透明、有隔菌丝，45°鹿角样分枝”，多提示曲霉属；看到“透明、少隔或无隔菌丝，菌丝宽大，直角分枝”，则提示毛霉目真菌。真菌丝是组成真菌菌丝体的独立丝状或管状结构，有隔或无隔。细胞壁通常平行，在分隔处没有内陷。菌丝顶端通过有丝分裂生长延长，末端细胞通常为圆柱形。菌丝分枝起始处没有缩窄，第一个分隔处距离分枝起始处有一定距离。假菌丝由一串延长的芽生孢子相互连接，形成类似菌丝的结构，连接处缩窄。在出芽过程中形成，末端芽生孢子通常为圆形或椭圆形，常在念珠菌属中产生。这些形态学概念直接影响检验报告，标本直接镜检真菌常用染色方法见下表。

宁按：上面显微镜检查，荧光抗体方式具有特异性。基础研究中，核酸原位杂交也有特异性。期待走入临床实验室。

显微镜检查历经百年依然屹立，是其具有培养/PCR/mNGS等不可替代的优势。就是可以看到真菌自身的形态特点，以及真菌和细胞的关系。似乎目前来看，二者永远也不会被其他技术替代。这是对眼睛与形态识别能力的奖励！

（四）菌种鉴定与结果解释升级

新版按菌属分类描述鉴定方法，大力推荐MALDI-TOF MS质谱鉴定技术。酵母菌基于菌落形态、镜下形态、芽管形成试验结果和念珠菌显色培养基菌落颜色形态等进行初步鉴定，推荐首选质谱或自动化生化鉴定系统；丝状真菌和双相真菌主要通过观察菌落形态和生长特性，结合乳酸酚棉蓝染色或小培养后显微镜镜下形态，综合分析后进行形态学鉴定，通常可鉴定到属，常见曲霉可鉴定到复合群，质谱对于部分常见丝状真菌和双相真菌可鉴定到种水平。实验室培养出的真菌可能是定植菌、污染菌，也可能是真正病原菌。判断临床意义时，应结合分离菌种及致病力、标本类型和采集方式、患者免疫状态、近期免疫抑制剂、糖皮质激素治疗情况、临床表现和既往史、职业暴露、旅居史、近期抗微生物药物治疗情况等综合分析。新版对结果解释更明确，从血液分离出真菌高度提示与疾病相关，尤其检出镰刀菌属、念珠菌属、隐球菌属、双相真菌、拟青霉属/紫孢霉属、单孢瓶霉属、帚枝霉属/枝顶孢属和毛孢子菌属等通常具有重要临床意义。但血中分离出青霉属、枝孢霉属、曲霉属(除外土曲霉)，多考虑污染。新版强调呼吸道标本(痰、BALF等)分离到丝状真菌，较难判断临床意义，需要结合临床综合分析，如患者免疫状态等。呼吸道分离到酵母菌常提示定植(隐球菌和双相真菌除外)；分离到耳念珠菌可考虑报告临床，并提示可能为定植菌，避免对“痰培养真菌阳性”的过度治疗。

宁按：培养鉴定结果解释部分，最好是有血管内插管的结果解释。8.3.3也可以区分一下导管血。

呼吸道标本部分，最好是明确写咳痰/抽吸痰标本分离到的念珠菌属菌种（除耳念珠菌），不必鉴定药敏，不必以到属或种的方式报告临床，可以简单报告为有酵母样菌（及半定量）。

念珠菌属尿路感染（UTI）的诊断，最好是明确写：没有定量培养的UTI诊断阈值。但尿液需要定量培养，1为了确诊尿路感染时的治疗效果判断；2为了无症状菌尿的判断等。

培养基中仅分离出单个菌落，不在划线上：不是仅仅针对单个菌落。二三个、三五个，如果都不在划线，也没有覆盖划线，那判断是一样的。

（五）药敏试验的“瘦身”与报告原则

新版删除了具体的药敏操作步骤，聚焦于“天然耐药”和“报告原则”。新版的天然耐药表明确列出克柔念珠菌、曲霉属对氟康唑天然耐药、隐球菌属、红酵母属和毛孢子菌属对棘白菌素类天然耐药等，供临床医生用药参考，具体见下图。

新版新增了不同标本中念珠菌属药敏试验结果报告原则，对药敏的报告审核很重要，见下图。

宁按：真菌药敏试验适应征：最好是区分治疗用、监测用。目前内容是治疗用角度。对监测用角度，可以提及，包括耳念珠菌——尽管大题目是实验诊断。

表3是天然耐药。正文最好是明确写，不推荐或反对成为临床治疗用药选择。毕竟，主动选择天然耐药的药物治疗，既是低端错误，对患者风险也很大。需要明确。对天然耐药的强调，也是我们日常工作的薄弱。

表4下面注：未列出的标本类型，暂无报告限制。其实，这里是针对深部感染。最好是明确写深部感染。业界一直对阴道分泌物念珠菌导致念珠菌性阴道炎时是否药敏，及根据什么折点进行解释，有困惑。明确写可以间接提示。

（六）生物安全及质量控制

真菌检验相关实验活动应在生物安全二级实验室进行，应符合WS/T 442 相关规定。可能含有高致病性真菌(如皮炎芽生菌、粗球孢子菌、波萨达斯球孢子菌、荚膜组织胞浆菌、巴西副球孢子菌等)的临床样本，个人严格防护下可在二级生物安全柜内进行初始接种和直接检查。得到初步鉴定结果后，不应继续在生物安全二级实验室开展其他活菌操作，如菌株传代培养等。处理高致病性真菌后，应对标本、培养物等进行灭菌，对实验室环境进行消毒。 丝状真菌检测应配置独立的二级生物安全柜，建议设置独立真菌检测区域或独立真菌实验室。标准还明确提出：丝状真菌培养物不能在生物安全柜外打开；禁止嗅闻培养物；培养平板或斜面需定期查看，防止过度生长和孢子逸出；建议使用带帽斜面培养基或封口膜密封平板培养基；丝状真菌培养物运输应采用斜面培养基等。

新版对真菌直接镜检、培养基、真菌药敏的质控频率、质控品及预期结果都有具体的要求，新增了室内比对，包括人员比对，设备或方法比对，室间质评及室间比对。使用新批次、新货次染液、培养基、药敏试剂等应进行质控。日常质控推荐至少每周进行1次，如检测频率低于每周1次，可在实验当日进行质控。日常药敏试验质控参考制造商具体要求，具体药敏质控要求按照WS/T421和WS/T411。由多名人员进行的手工检测或主观判定项目应进行人员比对，包括显微镜检查、培养结果判读、药敏结果读取等。每6个月1次，每次至少5份标本。同一项目使用多台设备或多种方法进行检测时，应进行比对，包括多种染色方法间比对，手工染片法和自动化染片法比对，不同鉴定方法或设备间比对等。每6个月1次，每次至少5份标本。所有项目均应参加能力验证/室间质评活动，对没有开展能力验证/室间质评的项目，应至少每6个月与其他实验室进行1次实验室间比对。对不合格结果进行分析并采取纠正和预防措施。其他相关质控要求见下图。

总之WS/T 497-2026 是一次从“单一培养”向“多技术融合”的跨越，它不仅规范了实验室操作，更为临床医生提供了更丰富的诊断技术选择。

宁按：总体上，该行标体现了近期国际上的专业进步和实际发展的中国特点，非常具有实用性，将是未来一段时间指导一线专业工作的必备文献。强烈推荐阅读、掌握、实践和反馈！

引申一下。也许，下面几个方向，需要我们在未来作进一步的努力。这样可以更好地完成实际工作，推进专业发展。

1.国际上基于EORTC指南确立的侵袭性深部真菌感染三层诊断，已经有20年左右历史。我们可以更好地发掘细化。比如针对不同患者群。国内，血液病领域有非常好的实践。国际上ICU领域也有进展。

2.mNGS结果里，条件致病菌尤其是低频率条件致病菌的临床判断原则，值得总结探索。最难的永远是结合部。这方面也许会发展出结合临床表现/其他检查/治疗效果等的人工智能判断方式。

3.诊断报告是业界期盼。比如隐球菌性脑膜炎、念珠菌性血流感染，是可以出诊断报告的。我们可以进一步探索。这是整个检验医学的薄弱，微生物学可以创出新天地，改变专业地位与影响。

4.药敏试验是用于治疗药物选择和效果判断的。可以就原则性的药物选择方式和疗效判断方式等，进一步探索。细节与原则并重。

5.感染暴发时的实验室检测，需要进一步明确。比如，耳念珠菌的暴发处置。个人的不正确的感觉，耳念这两年正在国内铺开，也许部分医院/科室要经历聚集性事件，值得关注。

另外，一直想作一个罕见菌的汇总。比如Neoscytalidium dimidiatum，Rhizomucor variabilis，Trichosporon inkin，Emergomyces species，Rasamsonia argillacea，Bjerkandera adusta。以及一些耐药菌的汇总，如Flucytosine-Resistant Candida tropicalis Clade（Emerg Infect Dis. 2025 Jul;31(7):1354-1364.），multidrug resistance of Candida parapsilosis complex（Microbiol Mol Biol Rev. 2024 Dec 18;88(4):e0002923.）。到目前还是没有汇总，期待未来！

上面引申内容，有一些空泛和偏颇，大家多指正！

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作者｜张秋莹（湖北省随州市中心医院）、宁永忠（北京市垂杨柳医院）

审校｜鲁炳怀（中日友好医院）、张利军（重庆医科大学附属第二医院）