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【CLSI直通车】第29版CLSI M100文件 ——附录H 应用分子方法进行耐药检测

2019-01-19 23:03

作者

前言部分

翻译:余霞(重庆市丰都县人民医院科教科)

审校:李婷(山西省运城市中心医院)

          宁永忠(清华大学附属垂杨柳医院)

附录H的缩写AST 

抗微生物药物敏感性试验(余注:参见中国行标WS/T 639-2018)

ESBL 超广谱β-内酰胺酶

KPC 肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(宁注:英文是Klebsiella pneumoniae carbapenemase。这个很容易误解。其实就是我们平时说的KPC酶,KP是用肺炎克雷伯菌来命名,但该酶不限于该菌。也就是说,大肠埃希菌可以产生“肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶”——字面上有些矛盾)

MIC 最低抑菌浓度

MRSA甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌

N/A 不适合

PBP2a 青霉素结合蛋白2a

VRE 万古霉素耐药肠球菌


抗微生物药物的耐药性和敏感性很复杂,现在已经有体外试验方法可以预测微生物对体内抗细菌治疗的反应。标准化的表型检测方法已经发展了数十年,但最近开发了更快且可能是更可靠的基于核酸和蛋白质的方法用以检测抗微生物药物的耐药性。目前医学实验室面临的挑战是如何将检测抗微生物药物耐药性的分子技术与传统的抗微生物药物敏感性试验(AST)规程相结合,尽管有时对检测有限性的认识还不够。


本附录表格提供了一种实用的方式,用于检测和报告医学实验室的结果——常规使用分子技术(伴或不伴表型检测)来检测抗微生物药物的耐药性。抗微生物药物耐药性具有遗传复杂性,基于现有数据(宁按:指既有数据有限)。分子方法通常用作筛选工具(如,鼻拭子监测MRSA)或作为传统表型方法的快速辅助(如,仪器报警血培养瓶检测KPC)。结果的解释需要深入思考和理解确认“耐药”的标志物和表型“敏感”之间的动态变化。检测出耐药性标志物并不必然预测抗微生物药物的治疗失败。该基因可能无功能,或表达水平低,不具临床意义。相反,遗传标志物的缺乏不一定表示敏感,因为技术问题可能干扰检测(如,抑制扩增,出现遗传变异)。有时,分子检测可能优于传统的表型检测,例如体外表达水平低,异质性耐药或微生物生长不佳掩盖了高值MIC。总体而言,实验室人员应努力对分子技术采取一致性的方式,并通过复检或补充试验,转至参考实验室,或根据机构政策(institutional policies)同时报告结果,来解决结果不一致的情况。


随着对抗微生物药物耐药性的分子机制的认识不断发展,毫无疑问在医学微生物学实验室会出现更尖端的分子检测技术,用以检测抗微生物药物的耐药性。以下表格将根据需要进行更新,以确保随着技术的发展相关指南能够有所体现。


表H1 用分子生物学和AST方法检测金黄色葡萄球菌对甲氧西林(苯唑西林)结果的报告策略


翻译:刘泽世(西安交通大学第二附属医院)

          吕春宝(辽宁省抚顺市中心医院)

审校:王晓玲(山西省中医院)

          鲁炳怀(中日友好医院)

          宁永忠(清华大学附属垂杨柳医院)


缩写:AST,抗微生物药物敏感性试验;CoNS,凝固酶阴性葡萄球菌;ISH,原位杂交;MSSA,甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌;MRSA,耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌;N/A,不适用;NAAT,核酸扩增试验;PBP2a,青霉素结合蛋白2a;PCR,聚合酶链反应;R,耐药;S,敏感

宁按:表中没有CoNS、MSSA、MRSA等缩写,下面评论里有。


评论

1)已观察到假阳性和假阴性的PBP2a胶乳凝集试验结果[1]。


2)罕有mecA阳性金黄色葡萄球菌株对头孢西丁测试敏感[2, 3]


3)mecA PCR不能检测到mecC或mecA变异基因介导的甲氧西林耐药[4, 5]。


4)mecA阳性的CoNS和MSSA的存在,可能导致MRSA分子结果假阳性[6, 7]。


5)携带不稳定SCCmec插入的菌株,在培养过程中可能丢失mecA[8]。


6)与培养法相比,分子方法的敏感性可能较高,特异性可能较低。


7)有报道,对直接血培养检测,偶尔有mecA假阴性[9]。


8)头孢西丁诱导步骤进行ISH检测,假阳性的mecA结果应该是罕见的[10]。


9)多微生物生长时,mecA的存在不能归于特定的分离株。


10)携带缺乏mecA基因(mecA丢失)的SCCmec残体的菌株或突变的mecA等位基因的菌株,可能只有SCCmec-orfX连接区靶标检测阳性。使用只检测SCCmec-orfX连接区靶标的分子方法的实验室,可以考虑在报告中添加一个免责声明,说明所服务患者群中分离出来的mecA信号丢失分离株相关假阳性结果的比例[11]。


11)存在多种SCCmec类型;根据试验设计,可能无法检测到一些SCCmec变体[12]。


脚注

a.测试甲氧西林耐药的菌株,也是苯唑西林耐药。术语“甲氧西林R”是“苯唑西林R”的同义词。


b.除了评论中所列的具体情况外,基因型和/或表型的差异,也可能由下列原因导致:次优抽样,混合生长,新基因型或突变的出现,和/或耐药靶标的野生型逆转(wild-type reversion)。

注意:黑体信息是对上一版的增改。(宁按:表H都是黑体)

宁按:野生型逆转(wild-type reversion),第一次看到。待方家教我。


表H1的引文:从略,详见原文p257。


审阅:王   辉  北京大学人民医院

          胡志东  天津医科大学总医院