2021-04-09 17:20
作者 王晓娟
京港感染论坛
早诊快诊，助力精准防治
摘 要
2021年CLSI M100 S31文件中Table 3E（Page148）提出了血培养初步药敏试验，即直接从阳性血培养肉汤中执行抗菌药物的纸片扩散法试验，以下简称血培养直接纸片扩散法试验。目前仅对肠杆菌目细菌血培养的直接药敏试验进行了标准化，可在血培养报阳16 ~ 18 h 后为临床及时选用有效抗菌药物提供帮助。
检测：血培养直接纸片扩散法试验
细菌种属：肠杆菌目
培养基：MH琼脂平板（Mueller-Hinton agar, MHA）
抗菌药物浓度
抗菌药物纸片及标准含量如下：
· 氨苄西林 10 μg
· 氨曲南 30 μg
· 头孢他啶 30 μg
· 头孢曲松 30 μg
· 妥布霉素 10 μg
· 磺胺甲恶唑/甲氧苄啶(复方新诺明) 23.75/1.25 µg
接种物
含革兰阴性杆菌的阳性血培养液，并在血培养系统显示阳性后8小时内检测
检测步骤
1. 颠倒混匀阳性血培养瓶5~10次，使其内容物充分混合。
2. 用无菌棉签蘸取酒精擦拭瓶顶消毒（晾干），将20号无菌注射器（相当于国内10 mL注射器，针口径约为0.8 mm）插入血培养瓶中。
3. 取4滴血培养液滴于MHA平板上；同时将血培养液接种于一块血平板上，三区划线后培养作为细菌纯度检测。
4. 用无菌棉签将血培养液涂布于MHA平板的整个表面。
5. 重复此步骤，再密涂布两次，每次旋转MHA平板约60度，以确保接种物均匀涂布于MHA平板的整个表面。
6. 将盖子半开3~5 min（理想情况下），但不超过15 min。
7. 打开平皿盖，将抗菌药物纸片分配器置于接种血培养液后的MHA平板表面。
8. 向下按压，确保每一张抗菌药物纸片与琼脂表面完全接触。
9. 倒置贴抗菌药物纸片的平板，并于15 min内将MHA平板放入孵箱。
培养环境
35 ℃ ± 2 ℃；空气环境
孵育时长
16 ~ 18 h
结果
1. 检查用于纯度检测血琼脂平板，以确保为单一细菌生长。
2. 根据标准纸片扩散法，检测MHA平板细菌生长情况，确保细菌融合生长以读取抗菌药物的抑菌圈直径。
3. 采用纸片扩散法的常规方法测量药物的抑菌圈直径。
4. 若被测革兰阴性杆菌为是肠杆菌目细菌，则根据CLSI M100文件中表2A的解释标准和抑菌圈直径折点报告试验结果。若为肠杆菌目外的其他细菌，不应解释或报告试验结果。
附加检测和报告
1. 若MHA平板上的细菌有两种或两种以上混合生长、生长不连续或生长模糊以至于难以判读结果时，不应解释或报告直接纸片扩散法试验结果，而应采用纯菌落执行标准的药敏试验。
2. 若细菌对抗菌药物天然耐药时，无论是否有抑菌圈，都应报告为该药耐药。
3. 如果存在两个抑菌圈时，应测量该抑菌圈的内径。如发现在抑菌圈内或抑菌圈内外均有菌落生长时，应检测血平板细菌生长纯度。若为纯菌落，则记录抑菌圈内径。
质控建议
大肠埃希菌ATCC 25922
参照标准纸片扩散法质控程序执行（如日质控或周质控）
王晓娟
医学博士，师从王辉教授，北京大学人民医院检验科副研究员，硕士生导师。担任中国医疗保健国际交流促进会临床微生物与感染分会工作秘书、中华医学会细菌感染与耐药防治分会青年委员、北京医学会第十三届检验医学分会微生物学组委员和《IDSA Journals中文版》编委青委委员。主要研究方向：临床微生物学检验和细菌耐药机制。以第一作者或并列第一作者发表论文14篇，其中SCI论文10篇。作为课题负责人主持国家自然科学基金2项，作为项目骨干参与1项科技部国家重点研发计划项目。
END
作者｜王晓娟 北京大学人民医院检验科
审校｜王晓娟
