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【CLSI直通车】血培养直接纸片扩散法药敏试验

2021-04-09 17:20

作者 王晓娟

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什么是弹幕样式?


A:

这个样式可以在公众号里随意“漂浮”,给读者一种耳目一新的感觉。如果你也觉得很新奇有趣,可以来尝试一下“漂浮”的感觉。



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  摘  要  


2021年CLSI M100 S31文件中Table 3E(Page148)提出了血培养初步药敏试验,即直接从阳性血培养肉汤中执行抗菌药物的纸片扩散法试验,以下简称血培养直接纸片扩散法试验。目前仅对肠杆菌目细菌血培养的直接药敏试验进行了标准化,可在血培养报阳16 ~ 18 h 后为临床及时选用有效抗菌药物提供帮助。






检测:血培养直接纸片扩散法试验

细菌种属:肠杆菌目

培养基:MH琼脂平板(Mueller-Hinton agar, MHA)




抗菌药物浓度

抗菌药物纸片及标准含量如下:

· 氨苄西林 10 μg

· 氨曲南    30 μg

· 头孢他啶 30 μg

· 头孢曲松 30 μg

· 妥布霉素 10 μg

· 磺胺甲恶唑/甲氧苄啶(复方新诺明) 23.75/1.25 µg


接种物

含革兰阴性杆菌的阳性血培养液,并在血培养系统显示阳性后8小时内检测


检测步骤

1. 颠倒混匀阳性血培养瓶5~10次,使其内容物充分混合。

2. 用无菌棉签蘸取酒精擦拭瓶顶消毒(晾干),将20号无菌注射器(相当于国内10 mL注射器,针口径约为0.8 mm)插入血培养瓶中。

3. 取4滴血培养液滴于MHA平板上;同时将血培养液接种于一块血平板上,三区划线后培养作为细菌纯度检测。

4. 用无菌棉签将血培养液涂布于MHA平板的整个表面。

5. 重复此步骤,再密涂布两次,每次旋转MHA平板约60度,以确保接种物均匀涂布于MHA平板的整个表面。

6. 将盖子半开3~5 min(理想情况下),但不超过15 min。

7. 打开平皿盖,将抗菌药物纸片分配器置于接种血培养液后的MHA平板表面。

8. 向下按压,确保每一张抗菌药物纸片与琼脂表面完全接触。

9. 倒置贴抗菌药物纸片的平板,并于15 min内将MHA平板放入孵箱。


培养环境

35 ℃ ± 2 ℃;空气环境


孵育时长

16 ~ 18 h


结果

1. 检查用于纯度检测血琼脂平板,以确保为单一细菌生长。

2. 根据标准纸片扩散法,检测MHA平板细菌生长情况,确保细菌融合生长以读取抗菌药物的抑菌圈直径。

3. 采用纸片扩散法的常规方法测量药物的抑菌圈直径。

4. 若被测革兰阴性杆菌为是肠杆菌目细菌,则根据CLSI M100文件中表2A的解释标准和抑菌圈直径折点报告试验结果。若为肠杆菌目外的其他细菌,不应解释或报告试验结果。


附加检测和报告

1若MHA平板上的细菌有两种或两种以上混合生长、生长不连续或生长模糊以至于难以判读结果时,不应解释或报告直接纸片扩散法试验结果,而应采用纯菌落执行标准的药敏试验。

2若细菌对抗菌药物天然耐药时,无论是否有抑菌圈,都应报告为该药耐药。

3. 如果存在两个抑菌圈时,应测量该抑菌圈的内径。如发现在抑菌圈内或抑菌圈内外均有菌落生长时,应检测血平板细菌生长纯度。若为纯菌落,则记录抑菌圈内径。


质控建议

大肠埃希菌ATCC 25922

参照标准纸片扩散法质控程序执行(如日质控或周质控)


作者简介



王晓娟

医学博士,师从王辉教授,北京大学人民医院检验科副研究员,硕士生导师。担任中国医疗保健国际交流促进会临床微生物与感染分会工作秘书、中华医学会细菌感染与耐药防治分会青年委员、北京医学会第十三届检验医学分会微生物学组委员和《IDSA Journals中文版》编委青委委员。主要研究方向:临床微生物学检验和细菌耐药机制。以第一作者或并列第一作者发表论文14篇,其中SCI论文10篇。作为课题负责人主持国家自然科学基金2项,作为项目骨干参与1项科技部国家重点研发计划项目。


END


作者|王晓娟 北京大学人民医院检验科

审校|王晓娟